2003年，参演青春爱情电视剧《情断上海滩》饰演孙伟正式出道。2011年，参演穿越电视剧《步步惊心》饰演十爷崭露头角。2015年，参演古装电视剧《蜀山战纪之剑侠传奇》。
2016年参演都市行业剧《一粒红尘》，饰演闵朗。12月，主演的青春励志偶像剧《食全食美》开机，饰演男主角打假卫士吴佑。2017年3月，参演的电影《嫌疑人X的献身》上映，饰演警官罗淼。
9月10日，电视剧《橙红年代》在北京举办的《橙红年代》开播发布会，虽说叶祖新和陈伟霆在剧中有深厚的交情，可是在发布会现场，陈伟霆竟当众爆料叶祖新 “花心”。
称其连马思纯饰演的女警察和陈瑶饰演的女企业家也不放过，而叶祖新则被怼到无力反驳，目测娱乐圈又有一对“塑料兄弟情”诞生了。
据悉，叶祖新饰演的“贝小帅”是一个外表看似不太靠谱，实际上“很有抱负”的热血青年。在接受某媒体采访时，叶祖新透露这个角色和之前作品相比有很大的不同，此次能否带来惊喜和突破，让人拭目以待。
电视剧《橙红年代》是一部现实主义作品，剧中刘子光成为无数平民百姓的缩影，也展现了警民齐心协力与犯罪分子斗争的决心。
