2000年,于娜前往北京发展并加入了新丝路模特公司,经过一系列的培训,于娜成为了新丝路模特公司的签约模特并陆续登上了京城几家服装、化妆、健康类杂志的封面;同年5月,于娜参加了首届中国内衣模特大赛并取得了的第4名成绩;同年6月,于娜还担任了北京国展中心大型车展的现场模特,同年9月,于娜在新丝路中国模特大赛北京赛区比赛中一举夺冠,并作为新丝路公司的模特新秀随团赴纽约参加了中国文化美国行的中国服装服饰展演;而后,于娜参加了新丝路中国模特大赛总决赛并最终赢得了女模冠军;同年11月,于娜又在北京世界超模大赛上获得了最佳亚洲形象奖;同年12月,于娜又在中国国际时装周上获得了最佳模特第3名。
2002年,于娜因与印小天、刘烨、傅晶联袂主演了根据海岩同名小说改编的都市爱情剧《拿什么拯救你,我的爱人》,并在剧中饰演天真善良的女主角罗晶晶而正式出道演艺圈;同年,于娜还与孙俪、何润东、印小天合作出演了爱情偶像剧《一米阳光》。
2003年,于娜先是与程煜、牛振华、于小慧共同出演了现代警匪剧《荣誉;同年,于娜还与何炅搭档主演了贺岁话剧《想吃麻花现给你拧》。
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