节目中，两位队长带领的“颜霸队”和“笑霸队”一路相爱相杀，在收官之战上演了精彩的终极对决。在第二季《二十四小时》中，“颜霸队”、“笑霸队”的分组被打破，节目将采用单人作战、两人配合、三人组合的自由组队方式，让成员们进行更灵活的互动。
机智boy韩庚，这位“体能担当”一碰到任务就开挂，强大的记忆力和通关能力给观众留下了深刻印象。帅气阳光少年“三石弟弟”吴磊在节目中敢打敢拼活力四射，敬业勇敢、智慧幽默还有乖萌属性让他圈粉无数，更让粉丝和观众们期待他在第二季中的表现。
“行走的段子手”大张伟包袱齐飞逗乐无数观众。在第一季《二十四小时》中大老师曾以嘉宾的身份参与节目录制，本季全新加盟“时空水手团”，这位“搞笑担当”一定会让这段冒险之旅欢乐升级。
除了“综艺咖”，新加盟的还有新生代。从饶雪漫小说里走出来的插画男主角周游曾在电视剧《左耳》中饰演尤他，这位“野兽派花美男”会不会给观众耳目一新的感觉呢？
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