《奔跑吧兄弟》”十二生肖悬案“嘉宾是苏有朋和张涵予。于2016年6月3日播出。本期节目，跑男团成员和嘉宾分别化身十二生肖中的动物，森林晚宴突然发生命案，所有的动物居民都有义务查出凶手是谁。
节目围绕猫的复仇而进行，由于猫没能入选十二生肖因此决定报复大家。线索一点点被发现，十二生肖的真实关系也随之曝光。猴子和老虎竞争王位，龙的犄角竟然是从鸡那里借的，羊，猴还有兔子之间还有复杂的感情线。
本期节目十分烧脑，观众没有上帝视角，只能跟着成员们一步步破案，在看谁都是真凶的情况下，是”陈小猪“率先发现”鹿小鼠“和”苏有蛇“与案件有密切关系，最终揪出了两位幕后黑手。
